Práctica 18: Tinción de GRAM-.

Nos hicimos con un cultivo de Proteus Gram- para realizar una tinción de Gram, y así poder observar mejor las bacterias.
Materiales que utilizamos:

• Microscopio.
• Tintes.
• Pinzas.
• Portaobjetos.
• Mechero.
• Aceite de inmersión.
• Asa de siembra.
• Siembra de Proteus.
• Paralelas.

Los pasos fueron similares a la práctica del otro día salvo que esta vez cogimos la muestra de un cultivo ya hecho, y cambiamos el orden de lavado con agua destilada, así pues los realizados fueron:

• Cogimos la muestra del cultivo Proteus con el asa de siembra esterilizada.
• En un porta con una gotita de agua destilada, restregamos la muestra cogida en el asa para hacer una mezcla homogénea. Estirilizamos el asa.

             

• Cogemos el porta con las pinzas y lo pasamos por el mechero hasta que quede bien sellada la muestra, pero sin quemarla.
• Lo llevamos a las paralelas para teñir:
• Echamos el tinte Violeta, esperamos 1 minuto, y lo lavamos con agua destilada.
• Echamos el lugol, y esperamos 1 minuto también.
• Lo lavamos con agua destilada y echamos el alcohol en el que esperamos 3 segundos.
• Por último echamos la Safranina y dejamos que actúe 3 minutos.
• Se vuelve a lavar con agua destilada, y se deja escurrir y secar.

• Por último llegó la hora de observar la muestra:

 

Autoclave.

El autoclave es un equipo de laboratorio que tiene el fin de esterilizar materiales de laboratorio o productos que se ingresen en él, mediante un sistema a vapor.
Este material tiene un cierre hermético autoclave, ya que se somete a altas presiones.

El funcionamiento que hay que llevar a cabo es:

• Conectarlo, es decir pone la ruleta de encendido en el I.
• Abrir la tapadera.
• Colocar en una bolsa especial para autoclave lo que se quiere esterilizar, manteniéndo la bolsa bien sellada.
• Se comprueba que el agua del equipo no sobrepase la rendija del suelo (elevando la cesta).
• Metemos en la cesta la bolsa con el material a esterilizar.
• Comprobamos que las válvulas estén bien hacia la derecha.
• Y finalmente, se cierra bien el autoclave.
• Ahora toca esperar.
• Se va mirando que suba a 120º la temperatura y que la presión va subiendo hasta que sea el adecuado. 
• Esperamos a que trascurra el tiempo que se le ha puesto en el mando, en este caso unos 20-25 minutos.
• Cuando haya pasado por todas las fases, y trascurrido ese tiempo, sonará una alarma. Eso quiere decir que tenemos que desconectarlo hasta que baje la presión para poder abrirlo.

Precauciones a tener en cuenta:

• Hay que mirar siempre que el nivel de agua no esté por encima, es decir sea el adeucado.
• También hay que fijarse que las válvulas estén a la derecha del todo.
• Mientras este funcionando hay que observar que sube a la temperatura y presión correctamente.
• Al igual que cuando pase el tiempo de esterilizar, esperar a que baje la presión para abrirlo (aunque no dejaría abrirlo), pero hay que tener cuidado y precaución en su manejo.

• 
   
  
  

Árbol de decisiones.

Con este término nos referimos a un esquema relacionado con el APPCC de cualquier alimento. Consiste en unas preguntas en su orden, y que según la respuesta sea si o no te llevará a diferentes caminos, con el fin de identificar los PPCC, es decir los peligros que puedan estar presentes en la cadena de un producto desde que se obtiene hasta que se convierta en producto final, siguiendo sus distintos procedimientos a los que está expuesto.

Un ejemplo de árbol de decisiones podría ser el siguiente:

Fuente: Pdf: Bueno APPCC

Tinción de GRAM.

La tinción de GRAM es una técnica de laboratorio que nos permite identificar diferentes tipos de bacterias según se tiña su superficie.

En este artículo vamos a comentar las distintas técnicas, materiales y conclusiones que se pueden percibir de este tipo de técnicas.

Características:

Fuente: dropbox: Pdf tinción de gram.

Materiales:

Fuente: dropbox: Pdf tinción de gram.

Ténica I:

Fuente: dropbox: Pdf tinción de gram.

Técnica II:

Fuente: dropbox: Pdf tinción de gram.

Observación al miscroscopio:

Fuente: dropbox: Pdf tinción de gram.

Resultados de la observación:

Fuente: dropbox: Pdf tinción de gram.

Fuente: dropbox: Pdf tinción de gram.

Conclusiones:

Fuente: dropbox: Pdf tinción de gram.

Fuente: dropbox: Pdf tinción de gram.

Enlace del pdf: Tinción de GRAM. 
Enlace de una práctica sobre esta técnica: Tinción de GRAM

Práctica17: Tinción de GRAM.

Nos preparamos para realizar una tinción de GRAM con una muestra de la boca de una compañera.
El material que hemos utilizado es:

• Asa de siembra de plástico para muestra de la boca.
• Papel de filtro.
• Mechero.
• Microscopio.
• Portaobjetos.
• Pinzas de madera.
• Hilo de platino.
• Pipeta Pasteur.
• Tintes.
• Aceite de inmersión.

Los pasos que se siguieron fueron los siguientes:

• Cogemos una muestra de la boca con el asa de siembra de plástico.
• Con la pipeta Pasteur cogemos una gota de agua destilada y la echamos en el portaobjetos.
• Con el asa de siembra de la muestra se hace una extensión en el portaobjetos mezclándolo bien con el agua destilada.
• Con ayuda de las pinzas lo pasamos por el mechero para que se adhiera bien la muestra al porta.
• Se lleva la muestra a las paralelas donde se va a teñir:
• Primero se le echa el tinte Violeta, y esperamos 1minuto.
• Después se le echa el Lugol y dejamos otro minuto para que actúe.
• A continuación se lava con agua destilada.
• Luego, se decolora con alcohol durante 3 segundos.
• Y por último se le echa la Safranina y dejamos que actúe durante 3 minutos.
• Se lava con agua destilada con cuidado.
• Y se deja secan al aire o pasandolo por el mecher.
• Ahora llega el momento de su observación.

    

                

 Observación: Comenzamos con el objetivo más pequeño y poco a poco vamos aumentando para una mejor visualización con más aumento, hasta llegar al x100 que hacemos uso del aceite de inmersión.
Viendo los resultados del último objetivo se puede observar pequeños puntos rojizos, eso quiere decir que estamos ante un GRAM+.

Objetivo x4

Objetivo x10

Objetivo x40

Objetivo x60

Objetivo x100

Práctica 16: Resiembra de medios de cultivo.

Esta práctica consistió tan solo en resembrar de un medio de cultivo ya realizado en un medio de cultivo vírgen.
Para ello disponemos de un medio de cultivo de enterobacterias.
Material utilizado:

• Medio de cultivo con enterobacterias.
• Medio de cultivo virgen.
• Papel de filtro.
• Asa de siembra.
• Mechero.

Pasos realizados:

1. Esterilizamos el asa de siembra con el mechero.
2. Cogemos del medio cultivado rastro de enterobacterias.
3. Volvemos a sembrar en un medio de cultivo vírgen, utilizando para ello una técnica de siembra en 5 puntos:

-Primero se extiendo en diagonal en una esquina, luego tocando la enterior extensión hacemos lo mismo siguiendo la forma de la placa, seguimos igual otras dos veces y en el último lo llevamos hasta el medio de la placa. Esterilizando el asa entre entensión y extensión.

Práctica 15: Kliger Iron Agar.

Pusimos en práctica 3 técnicas:

1. Kliger.
2. Siembra en placas.
3. Tinción simple.

Utilizamos los siguintes materiales:

• Kliger.
• Medio de cultivo.
• Placa de petry.
• Hilos de platino.
• Tubo de ensayo.
• Gradilla.
• Mechero de etanol.
• Portaobjetos.
• Colorante.
• Puente.
• Paralelas.
• Pinzas.
• Microscopio.
• Aceite de inmersión.
• Asa de siembra.
• Agar estándar.

1. Kliger:

En esta técnica, tratamos de cultivar en un kliger, y para ello seguimos los siguientes pasos:

• Cogemos un medio de cultivo que realizamos anteriormente (manos y boca).
• Con el hilo de platino cogemos del cultivo donde se vea que este sembrado.
• Abrimos el tubo con el dedo meñique, y lo pasamos por el mechero para esterilizarlo.
• Después, introducimos el hilo de platino en el kliger pinchando hasta casi el fondo.
• A partir de ahí, se va sacando y cuando llegue a la superficie vamos haciendo zig-zag hasta finalizar el kliger.
• Se vuelve a tapar el tubo que sigue en el dedo meñique.
• Por último esterilizamos el hilo de platino.
• Después de ahí se mete en la estufa microbiológica.

• Al cabo de unos días observamos el resultado:

  2. Siembra en placa petry con agar estandar:

• Una vez esterilizada el asa de siembra con el mechero, cogemos una muestra del cultivo de boca o mano que habíamos previamente realizado.
• Cogemos la placa de petry virgen, y vamos a realizar una nueva siembra, en este caso utilicé la técnica de los 4 cuadrantes y en zig zag.
• Y finalmente se tapa, se da la vuelta y se mete también en la estufa microbiológica.

                            

3. Tinción simple:

• Cogemos una pequeña gota de agua destilada y la echamos en el portaobjetos.
• Cogemos una muestra del cultivo con el asa de siembra (previamente esterilizada), y pasamos el asa de siembra con la muestra por el agua mezclandola, finalmente esterilizamos de nuevo el asa de siembra.
• Cogemos el portaobjetos con la muestra con las pinzas y lo pasamos por el mechero con movimiento (para que no se queme la muestra), para que se adhiera la muestra al porta. Y la llevamos a las paralelas, donde vamos a realizar la tinción.
• Le echamos a la muestra unas gotas de azul de metileno y esperamos 5 minutos.
• Con cuidado le echamos agua destilada para retirar el tinte sobrante, y lo llevamos a escurrir verticalmente en el papel de filtro.
• Ahora llegó la hora de observarlo al microscopio.

 

• Resultado de la observación: