Investigación y recuento de enterobacterias lactosa-positivas: COLIFORMES.

Los objetivos que se pensaban desarrollar en esta presentación son:

Las características que presentan estos coliformes son:

La preparación de las diluciones decimales se lleva a cabo de la siguiente forma y con el siguiente material:

Su recuento en el medio líquido se lleva a cabo de la siguiente fomra y con el siguiente material:

Los resultados se leen e interpretan de la siguiente forma:

Conclusiones de la ténica:

 [ Ejemplo de coliformes totales y E.coli.]

• Bibliografía de las fotos:

Universidad Politécnica de Valencia.

Práctica 21: Levadura.

Para realizar algo distinto, cogimos levadura fresca y nos dirigimos a su observación.

Para ello, utilizamos los siguientes materiales:

• Levadura fresca.
• Azúcar.
• Microscopio.
• Portaobjetos.
• Asa de siembra.
• Vaso de precipitado.
• Agua destilada.

Comenzamos por:

• Cogimos un trozo de levadura y lo echamos en un vaso de precipitado con un poco de agua destilada y azúcar, para ver su cambio.
• Lo homogeneizamos, y cogemos una muestra con el asa de siembra.
• Hacemos un frotis en el porta, y nos dirigimos a su observación.

 

Práctica 21: Posibles coliformes sobre una muestra de carne picada.

Teníamos una muestra de carne picada reservada para esta práctica.
Los materiales que utilizamos fueron:

• Tubos de ensayo.
• Carne picada.
• Agua destilada.
• Agua de pectona.
• Cultivo verde bilis brillante.
• Cazo y cazuela.
• Pesa.
• Estomacher.
• Agitador de tubos.
• Placa calefactora.
• Pipeta automática y puntas.
• Microscopio.
• Portaobjetos.
• Tintes.
• Paralelas.
• Pipeta Pasteur.

Seguimos los siguientes pasos:

1. Por un lado, comenzamos por hacer el cultivo a partir del verde bilis brillante, y lo metemos en tubos.

            

2. A la vez realizamos una seriada de 1-10 con 3 tubos de ensayo, con 1 g de la muestra de carne y 10ml de agua de pectona.

Seria: 1-10-100.

Para ello metemos en el primer tubo la muestra y la agitamos hasta que se haga homogénea o con el estomacher. Después con una pipeta automática cogemos 1ml del primer tubo y pasamos al tubo 2 y hacemos lo mismo, se mezcla y al tubo 3. (En cada cogida de 1ml se cambia la  punta de pipeta).

 

3.Con ello, realizamos un frotis de la primera muestra para realizar una tinción simple primero y después una tinción de GRAM y visualizarlos al microscopio.

 


4. Por último realizamos la observación con el microscópio:

Tinción simple

Tinción simple

 

Práctica 20: Siembra de caldo

Nos confundimos con el caldo bilis verde brillante el día anterior, ya que pesamos que era agar y no solidificó.
Entonces aprovechamos para echarlo en tubos de ensayo, y mezclarlo con una muestra de un cultivo de enterobacterias que había reservado.

Los materiales usados:

• Caldo bilis verde brillante.
• Tubos de ensayo.
• Gradillas.
• Embudo.
• Asa de siembra.
• Cultivo de enterobacterias.
• Tapones para los tubos de ensayo.

 

Práctica 19: Varias prácticas.

Se realizaron 3 prácticas diferentes que resultaron bastante interesante para coger soltura y aprender a usar el estomacher.
La primera técnica que se realizó fue: Preparacion de diluciones decimales y manejo y uso del estomacher.
Este ejercició se llevó a cabo con la cáscara de un huevo y con un yogur con trozos de nuez.
El material utilizado fue:

• Estomacher.
• Bolsa de estomacher.
• Huevo.
• Yogur.
• Gradilla.
• Pipeta y pera.
• Tubos de ensayo.
• Agua de peptona.
• Bol de porcelana.
• Tanita.

Y los pasos que se siguieron fueron:

1. Pesar 10g de la muestra tanto de yogur como de cáscara del huevo, la cáscara se machaca para evitar la rotura de la bolsa. 
2. Se mete en la bolsa con 90ml de agua de peptona y en el estomacher, y se pone en funcionamiento.
3. Una vez hecha la mezcla homogénea, se preparan los tubos de ensayos en la gradilla.
4. Con la pipeta coger 9ml de agua de peptona y echarla en los tubos.
5. Se coge 1 ml del primer líquido de la muestra y se echa en el primer tubo, de ese 1 ml y al segundo tubo y así hasta el último.

Con el primer líquido de la muestra también realizamos un frotis en el portaobjetos para su observación en el microscopio.

-Realización de 3 medios de cultivo diferentes:

• Agar Estándar: 11.75g/0.5L agua destilada.
• Agar MacCconkey: 25.75g/0.5L.
• Caldo bilis verde brillante: 20g/0.5L.

 

Realizamos el método de inundación con una muestra del huevo con el agar estándar y el caldo verde bilis: este método consiste en echar 1 ml (huevo) de los tubos de ensayo, encima del cultivo ya bien espeso en la placa de petry, repartirlo y quitar el exceso con una ppipeta pasterur.

Una vez retirado el exceso meter en el horno de cultivo.

Realizamos el método Barry que es totalmente lo contrario, es decir, echamos 1 ml (yogur) de los tubos de ensayo, en la placa petry y encima el medio de cultivo aún líquido.

Una vez finalizado meter en el horno de cultivo.